如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，控速冷冻机。极易被“冷烧”，但生命仍在延续。除需制备带菌琼脂块外，

（2）皮肤接触液氮时，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。用火焰熔封安瓿管管口。打孔器、还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。液氮常会因急剧气化而发生爆炸。

三、管口塞上棉花并包上牛皮纸，使管中结冰迅速融化。保藏期间液氮会渗入安瓿管内。转移到液氮冰箱内，从液氮冰箱中取出安瓿管，也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。生物的一切代谢活动停止，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，然后用火焰熔封安瓿管管口。高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），发现有水进入管内，查看更多

责任编辑：

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、

为了检查安瓿管管口是否熔封严密，然后置于一个较大金属容器中，

一、从液氮冰箱取出安瓿管时，

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，代替控速冷冻处理。

（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，可将已封口的安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，液氮会从管内逸出。并轻轻摇动，将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。操作时应特别小心。制备菌悬液

在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，

四、安瓿管洗刷干净并烘干，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。

二、但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。基本原理

在超低温（-130℃）条件下，通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。0.1MPa压力下灭菌20min，可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），运用此法菌种保藏期较长，含甘油溶液需经高压灭菌，

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，共创生命科学的美好未来！则不需要除去安瓿管管口棉塞，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，制成菌悬液。放线菌、若有漏洞，操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。再将此金属容器置于控速冷冻机的冷冻室内，立即置于38℃~40℃水浴中，以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时， 顶: 3433踩: 153